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Reduktion der Disulfidbindung

ROXY-Reaktoren für die Reduktion von Disulfidbindungen

Das ROXY Exceed mit einem EC-Reaktor wurde für die schnelle und effiziente Reduktion von Disulfidbindungen in Proteinen entwickelt. Die Reduktion von intra- und intermolekularen Disulfidbindungen ist ein kleiner, aber entscheidender Schritt im Arbeitsablauf für eine erfolgreiche Strukturaufklärung und Zuordnung der Bindungsstellen durch MS. Die Methode basiert auf einem elektrischen Potential zur Auslösung der Reduktionsreaktion, es werden keine reduzierenden Chemikalien verwendet.

Traditionell wird die Reduktion mit konzentrierten Chemikalien durchgeführt, z . B. mit Dithiothreitol (DTT), das vor der LC/MS-Analyse entfernt werden muss. Alternativ können auch thiolfreie Reduktionsmittel wie TCEP (Tris(2-carboxyethyl)phosphin) verwendet werden. Die Probenvorbereitung ist jedoch nach wie vor aufwändig und lässt sich nur schwer mit der Online-LC/MS kombinieren. Die Elektrochemie in einem Online-Setup mit MS ist sauber, es werden keine Chemikalien benötigt und das Ergebnis kann sofort überprüft werden.

Weitere Einzelheiten finden Sie auf unserer Technologieseite.

Das Aufbrechen einer Disulfidbindung in einem elektrochemischen Durchflussreaktor erfordert ein Potenzial von etwa -1 V.

Insulin

Insulin, ein kleines Protein von 5733 Da, wird als Modellverbindung für die S-S-Reduktion verwendet. Es besteht aus 51 Aminosäuren, die zwei Ketten, A und B, bilden, und enthält 3 Disulfidbindungen. Zwei S-S-Bindungen zwischen den Ketten, die die Ketten A und B verbinden, und eine S-S-Bindung innerhalb der Kette A. Die Disulfidbindungen können mit einem elektrochemischen Reaktor vollständig reduziert werden.

Eine fast vollständige Reduktion aller drei S-S-Bindungen in Insulin wurde mit dem ROXY EC System up-front MS erreicht.

Applikationen

 

Name
Doc#
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Superior Characterization of Protein Therapeutics
210_003_01
1.12 MB
Reduction of Disulfide Bonds in Proteins
210_006_05
0.83 MB
Reduction and Engineering of mAbs
210_008_04
0.69 MB
Electrochemical Reduction of Biopharmaceuticals in HDX-MS
210_009_06
2.43 MB
Monitoring Electrochemical Reduction
210_010_04
1.00 MB
Superior Reduction of Disulfide Bonds in HDXMS
210_013_02
1.37 MB
Metabolism of 3 New Cardiovascular Drugs
210_014_02
1.20 MB
Electrochemical Reduction of Biopharmaceuticals
210_015_02
0.81 MB
Antibody subunit analysis via EC Reduction
210_000_01
0.67 MB
Improved and universal inline electrochemical reduction of mAbs
210_000_02
2.05 MB

Poster

 

Name
Doc#
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Reduction (Insuline, Avastin Fab)
221_241_01
1.67 MB
New EC cell for reduction of protein disulfide bonds in HDX─MS (Insuline, NGF, VEGF)
221_244_01
5.42 MB
EC Reduction of Disulfide Bonds in Proteins & Biopharmaceuticals (Insulin, Avastin Fab, NGF, VEGF)
221_248_02
4.88 MB