AAT – Aminosäure-Falle
- Effizientes Einfangen von Aminosäuren/kleinen Peptiden
- Einfache Installation, als Vorsäule
- 4 x 50 mm Säule, 5 µm Harz
Bei der Analyse der Zusammensetzung von Monosacchariden aus Glykoproteinen mit HPAEC-PAD kann die Anwesenheit von Aminosäuren und kleinen Peptiden die Quantifizierung der interessierenden Analyten stören.
Diese Aminosäuren und kleinen Peptide entstehen bei der sauren Hydrolyse von Glykoproteinen, um die Monosaccharide aus dem Proteingerüst freizusetzen.
Wenn die Konzentration der Aminosäuren, insbesondere von Lysin und Glutamin, im Vergleich zu den freigesetzten Monosacchariden hoch genug ist, stören sie die Quantifizierung der Monosaccharide aufgrund von Koelution.
Darüber hinaus werden Aminosäuren aufgrund der suboptimalen Potenzialwellenform, die für den Monosaccharid-Nachweis verwendet wird, weniger effizient von der Au-Elektrodenoberfläche entfernt, was zu Verschmutzung und einem Verlust der Reaktion führen kann.
Um die Störung durch Aminosäuren zu beseitigen und eine optimale Leistung Ihrer Monosaccharid-Analyse mit dem HPAEC-PAD zu gewährleisten, führt Antec Scientific eine Aminosäure-Fallensäule ein.
Die Aminosäurefängersäule basiert auf einem neuartigen monodispersen 5 µm Polymerharz, das mit aktiven Gruppen funktionalisiert ist, die die Elution von Aminosäuren und kleinen Peptiden unter den bei der HPAEC-PAD-Monosaccharidanalyse verwendeten Trennbedingungen (10 – 20 mM NaOH) vorübergehend einfangen oder verzögern.
Anschließend werden die eingefangenen Aminosäuren während des Wasch-/Regenerationsschritts bei hohem pH-Wert (typischerweise 100 – 200 mM NaOH) eluiert, ohne die Oberfläche der Au-Arbeitselektrode zu verschmutzen.
Die Leistung der Aminosäurefalle ist in Abbildung 1 dargestellt.
Eine Mischung aus 6 Monosacchariden und 4 Aminosäurestandards wurde auf eine SweetSep™ AEX20-Säule mit und ohne Trap-Säule injiziert.
Ohne eine Aminosäurefalle im System koeluieren vor allem Lysin und Glutamin mit den interessierenden Monosacchariden.
Es ist offensichtlich, dass mit der Aminotrap-Säule das Problem der Koelution von Aminosäuren effektiv beseitigt wird.
Abb. 1. Analyse von Kohlenhydraten mit und ohne SweetSep™-Aminosäurefalle.
Störende Peaks von Lysin und Glutamin sind im oberen Chromatogramm nicht mehr zu sehen.
Bedingungen: Trennung auf der SweetSep™ AEX20 Säule unter Verwendung eines 20 mM NaOH Eluenten (30°C, 0,7 mL/min).
Die Aminosäuretrap-Säule wird als Vorsäule verwendet.
Injizierte Probe: 10 µL Standards in DI-Wasser mit 10 µM Monosacchariden (Fucose, Galactosamin, Glucosamin, Galactose, Glucose und Mannose) und 1 mM Aminosäuren (Arginin, Lysin und Glutamin).
Oben (rot): mit Aminosäurefalle; Unten (schwarz): ohne Aminosäurefalle.
Aminosäuren in rot markiert.