Reducción del enlace disulfuro
Reactores ROXY para la reducción de enlaces disulfuro
El ROXY Exceed con un reactor EC ha sido desarrollado para la reducción rápida y eficaz de los enlaces disulfuro en las proteínas. La reducción de los enlaces disulfuro intra e intermoleculares es un paso pequeño pero crucial en el flujo de trabajo para la elucidación exitosa de la estructura y la asignación de los sitios de enlace por EM. El método se basa en un potencial eléctrico para desencadenar la reacción de reducción, no se utilizan productos químicos reductores.
Tradicionalmente, la reducción se realiza utilizando productos químicos concentrados, como el ditiotreitol (DTT), que debe eliminarse antes del análisis LC/MS. Como alternativa, pueden utilizarse agentes reductores libres de tioles, como la TCEP (tris (2-carboxietil) fosfina). Sin embargo, la preparación de las muestras sigue siendo laboriosa y difícil de combinar con la LC/MS en línea. La electroquímica en una configuración en línea con EM es limpia, no se necesitan productos químicos y el resultado puede controlarse instantáneamente.
Para más detalles: consulte nuestra página sobre tecnología.
La ruptura de un enlace disulfuro en un reactor electroquímico de flujo continuo requiere un potencial de aproximadamente -1 V.
Insulina
La insulina, una pequeña proteína de 5733 Da, se utiliza como compuesto modelo para la reducción S-S. Consta de 51 aminoácidos que forman dos cadenas, A y B, y contiene 3 enlaces disulfuro. Dos enlaces S-S intercadena que conectan las cadenas A y B y un enlace S-S intracadena situado en la cadena A. Los enlaces disulfuro pueden reducirse completamente utilizando un reactor electroquímico.
