Riduzione del legame disolfuro nelle proteine

• Riduzione rapida e lieve
• Sostituzione della chimica umida (dura)
• Nessun rischio di soppressione degli ioni
• Assegnazione di obbligazioni S-S superiori

I legami disolfuro sono una delle più importanti modificazioni post-traslazionali delle proteine. Stabilizzano la struttura 3D delle proteine e sono fondamentali per la loro funzione biologica. La riduzione dei legami disolfuro intra- e intermolecolari è necessaria per la caratterizzazione e l’assegnazione dei siti di legame mediante MS. La riduzione off-line viene eseguita utilizzando agenti chimici altamente concentrati, come il ditiotreitolo (DTT), che devono essere rimossi prima dell’analisi LC/MS. In alternativa, si possono utilizzare agenti riducenti privi di tioli, come il TCEP (tris (2-carbossietil) fosfina). Tuttavia, la preparazione dei campioni rimane laboriosa e difficile da combinare con la LC/MS on-line. Inoltre, la possibilità di ridurre i legami disolfuro in linea può essere vantaggiosa per la determinazione delle disposizioni dei legami disolfuro o per la strategia di proteomica top down, che si basa sulla frammentazione delle proteine intatte senza digestione enzimatica.

Infine, l’uso di (LC)/EC/MS mostra un grande potenziale per l’assegnazione rapida dei legami S-S nei biofarmaci. I sistemi ROXY EC e ROXY EC/LC, con i loro elettrodi proprietari a base di titanio, sono gli strumenti ideali per eseguire tali studi.

Riduzione elettrochimica assistita dei legami disolfuro nell’insulina

L’insulina, una piccola proteina di 5733 Da, viene utilizzata come composto modello per la riduzione S-S. È composto da 51 aminoacidi che formano due catene, A e B, e contiene 3 legami disolfuro. Due legami S-S intercatena che collegano le catene A e B e un legame S-S intracatena situato sulla catena A.

La riduzione quasi completa di tutti e tre i legami S-S nell’insulina è stata ottenuta utilizzando il sistema ROXY EC up-front MS.