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Réduction de la liaison disulfure » Réduction des liaisons disulfure dans les protéines

Réduction des liaisons disulfure dans les protéines

Réacteurs ROXY pour la réduction des liaisons disulfures

  • Réduction rapide et douce
  • Remplacer les produits chimiques humides (agressifs)
  • Aucun risque de suppression des ions
  • Affectation supérieure des obligations S-S

Les liaisons disulfure sont l’une des plus importantes modifications post-traductionnelles des protéines. Ils stabilisent la structure 3D des protéines et sont essentiels à leur fonction biologique. La réduction des liaisons disulfure intra- et intermoléculaires est nécessaire pour une caractérisation et une affectation réussies des sites de liaison par MS. La réduction hors ligne est réalisée à l’aide d’agents chimiques hautement concentrés, par exemple le dithiothreitol (DTT), qui doivent être éliminés avant l’analyse LC/MS. On peut également utiliser des agents réducteurs sans thiol tels que le TCEP (tris (2-carboxyéthyl) phosphine). Cependant, la préparation des échantillons reste laborieuse et difficile à combiner avec la LC/MS en ligne. En outre, la possibilité de réduire les liaisons disulfure en ligne peut être bénéfique pour la détermination des arrangements de liaisons disulfure ou la stratégie de protéomique descendante, qui repose sur la fragmentation de protéines intactes sans digestion enzymatique.

Enfin, l’utilisation (LC)/EC/MS montre un grand potentiel pour l’affectation rapide des liaisons S-S dans les produits biopharmaceutiques. Les systèmes ROXY EC et ROXY EC/LC, avec leurs électrodes exclusives à base de titane, sont les instruments idéaux pour réaliser de telles études.

Réduction des liaisons disulfure de l’insuline assistée par voie électrochimique

L’insuline, une petite protéine de 5733 Da, est utilisée comme composé modèle pour la réduction S-S. Il est constitué de 51 acides aminés formant deux chaînes, A et B, et contient 3 liaisons disulfure. Deux liaisons S-S inter-chaînes reliant les chaînes A et B et une liaison S-S intra-chaîne située sur la chaîne A.

 

Une réduction presque complète des trois liaisons S-S dans l’insuline a été obtenue en utilisant le système ROXY EC up-front MS.

La rupture d’une liaison disulfure dans un réacteur électrochimique à circulation continue nécessite un potentiel d’environ -1 V.