Riduzione del legame disolfuro
Reattori ROXY per la riduzione dei legami disolfuro
Il ROXY Exceed con reattore EC è stato sviluppato per la riduzione rapida ed efficiente dei legami disolfuro nelle proteine. La riduzione dei legami disolfuro intra- e intermolecolari è un passo piccolo ma cruciale nel flusso di lavoro per l’elucidazione della struttura e l’assegnazione dei siti di legame tramite MS. Il metodo si basa su un potenziale elettrico per innescare la reazione di riduzione, senza utilizzare sostanze chimiche riduttive.
Tradizionalmente, la riduzione viene eseguita utilizzando sostanze chimiche concentrate, ad esempio il ditiotreitolo (DTT) che deve essere rimosso prima dell’analisi LC/MS. In alternativa, si possono utilizzare agenti riducenti privi di tioli, come il TCEP (tris (2-carbossietil) fosfina). Tuttavia, la preparazione dei campioni rimane laboriosa e difficile da combinare con la LC/MS on-line. L’elettrochimica in una configurazione on-line con MS è pulita, non richiede l’uso di sostanze chimiche e il risultato può essere monitorato istantaneamente.
Per maggiori dettagli: consultare la pagina dedicata alla tecnologia.
La rottura di un legame disolfuro in un reattore elettrochimico a flusso passante richiede un potenziale di circa -1 V.
Insulina
L’insulina, una piccola proteina di 5733 Da, viene utilizzata come composto modello per la riduzione S-S. È composto da 51 aminoacidi che formano due catene, A e B, e contiene 3 legami disolfuro. Due legami S-S intercatena che collegano le catene A e B e un legame S-S intracatena situato sulla catena A. I legami disolfuro possono essere completamente ridotti utilizzando un reattore elettrochimico.
