Reducción del enlace disulfuro en las proteínas

• Reducción rápida y suave
• Sustitución de la química húmeda (dura)
• Sin riesgo de supresión de iones
• Asignación de fianza S-S superior

Los enlaces disulfuro son una de las modificaciones postraduccionales más importantes de las proteínas. Estabilizan la estructura tridimensional de la proteína y son cruciales para su función biológica. La reducción de los enlaces disulfuro intra e intermoleculares es necesaria para caracterizar y asignar con éxito los sitios de enlace mediante EM. La reducción fuera de línea se realiza utilizando agentes químicos altamente concentrados, por ejemplo, ditiotreitol (DTT), que deben eliminarse antes del análisis LC/MS. Como alternativa, pueden utilizarse agentes reductores libres de tioles, como la TCEP (tris (2-carboxietil) fosfina). Sin embargo, la preparación de las muestras sigue siendo laboriosa y difícil de combinar con la LC/MS en línea. Además, la posibilidad de reducir en línea los enlaces disulfuro puede ser beneficiosa para la determinación de las disposiciones de los enlaces disulfuro o la estrategia de proteómica top down, que se basa en la fragmentación de proteínas intactas sin digestión enzimática.

Por último, el uso (LC)/EC/MS muestra un gran potencial para la asignación rápida de enlaces S-S en biofármacos. Los sistemas ROXY EC y ROXY EC/LC, con sus electrodos patentados basados en titanio, son los instrumentos ideales para realizar este tipo de estudios.

Reducción electroquímica asistida de los enlaces disulfuro en la insulina

La insulina, una pequeña proteína de 5733 Da, se utiliza como compuesto modelo para la reducción S-S. Consta de 51 aminoácidos que forman dos cadenas, A y B, y contiene 3 enlaces disulfuro. Dos enlaces S-S intercadena que conectan las cadenas A y B y un enlace S-S intracadena situado en la cadena A.

Se obtuvo una reducción casi completa de los tres enlaces S-S en la Insulina utilizando el sistema ROXY EC up-front MS.