HDX-MS superior

• Reducción rápida y eficaz de los enlaces disulfuro
• Mayor cobertura de secuencias en HDX/MS
• Mejor caracterización de la región bisagra de anticuerpos, nudos de cistina y otras proteínas ricas en cistina
• No afecta al cambio a posteriori
• Electrones en lugar de productos químicos tóxicos

El intercambio hidrógeno-deuterio (HDX) se utiliza para estudiar la estructura terciaria de las proteínas o su plegamiento. Las regiones externas de la proteína plegada sufren un fácil intercambio de Hidrógeno (H) por Deuterio (D). En los siguientes pasos del flujo de trabajo, las proteínas se despliegan y la secuencia de aminoácidos se dilucida mediante EM. Los aminoácidos con deuterio proceden obviamente de la región externa de la proteína plegada. Para obtener resultados fiables, es importante que la reacción de intercambio H/D se detenga (se apague) y se conserven los cambios, una vez que se produzca el desdoblamiento de las proteínas y los pasos siguientes.

La reducción electroquímica controlada de los enlaces S-S se ha aplicado con éxito para el desdoblamiento de proteínas de mayor tamaño, como los anticuerpos, sustituyendo a la dura reducción química que a menudo ponía en peligro el intercambio H/D. El uso de agentes reductores clásicos como el DTT o el TCEP suelen ser ineficaces en condiciones de enfriamiento (pH ácido y baja temperatura). Por lo tanto, el uso de ROXY EC con sus electrodos patentados basados en titanio para la escisión suave y controlada del enlace S-S abre nuevas oportunidades en los flujos de trabajo HDX/MS, dando como resultado una cobertura de secuencia significativamente mayor.

Las dos figuras muestran la cobertura de la secuencia para el Factor de Crecimiento Nervioso-β con reducción química y electroquímica (EC). La integración de la célula de flujo electroquímica en el flujo de trabajo HDX/MS dio como resultado una cobertura de secuencia mucho mayor que la reducción química (99% frente a 46%), lo que permitió una caracterización mucho más exhaustiva del NGF. Adaptado de Trajberg E. et al., Anal. Chem.87 (2015) 8880.