AAT – Trappola per aminoacidi
- Cattura efficiente di aminoacidi/piccoli peptidi
- Installazione semplice, sostituisce la precolonna
- Colonna 4 x 50 mm, resina da 5 µm
Nell’analisi compositiva dei monosaccaridi delle glicoproteine mediante HPAEC-PAD, la presenza di amminoacidi e piccoli peptidi può interferire con la quantificazione degli analiti di interesse.
Questi amminoacidi e piccoli peptidi vengono generati durante l’idrolisi acida delle glicoproteine per liberare i monosaccaridi dalla spina dorsale proteica.
Se la concentrazione di aminoacidi, in particolare di lisina e glutammina, è sufficientemente alta rispetto a quella dei monosaccaridi rilasciati, essi interferiscono con la quantificazione dei monosaccaridi a causa della coeluizione.
Inoltre, gli amminoacidi vengono rimossi in modo meno efficiente dalla superficie dell’elettrodo di Au a causa della forma d’onda di potenziale non ottimale applicata per la rilevazione dei monosaccaridi, il che potrebbe causare incrostazioni e perdita di risposta.
Per eliminare l’interferenza degli amminoacidi e garantire prestazioni ottimali nelle analisi dei monosaccaridi con HPAEC-PAD, Antec Scientific ha introdotto una nuova colonna trappola per amminoacidi.
La colonna trappola per aminoacidi si basa su una nuova resina polimerica monodispersa da 5 µm funzionalizzata con gruppi attivi che intrappolano o ritardano temporaneamente l’eluizione di aminoacidi e piccoli peptidi nelle condizioni di separazione (10-20 mM NaOH) utilizzate nell’analisi dei monosaccaridi HPAEC-PAD.
Successivamente, gli amminoacidi intrappolati vengono eluiti durante la fase di lavaggio/rigenerazione a pH elevato (in genere 100-200 mM NaOH), senza sporcare la superficie dell’elettrodo di lavoro Au.
Le prestazioni della trappola per amminoacidi sono dimostrate nella figura 1.
Una miscela di 6 monosaccaridi e 4 standard di amminoacidi è stata iniettata su una colonna SweetSep™ AEX20 con e senza trappola.
Senza una trappola per amminoacidi nel sistema, in particolare la lisina e la glutammina coeluiscono con i monosaccaridi di interesse.
È evidente che con la colonna trappola per amminoacidi il problema della coeluizione degli amminoacidi viene efficacemente eliminato.
Figura 1. Analisi dei carboidrati con e senza trappola per amminoacidi SweetSep™.
I picchi interferenti di lisina e glutammina non sono più un problema nel cromatogramma superiore.
Condizioni: separazione su colonna SweetSep™ AEX20 con eluente NaOH 20 mM (30°C, 0,7 mL/min).
Campione iniettato: 10 µL di standard in acqua DI di 10 µM di monosaccaridi (fucosio, galattosamina, glucosamina, galattosio, glucosio e mannosio) e 1 mM di amminoacidi (arginina, lisina e glutammina).
In alto (rosso): con trappola per amminoacidi; in basso (nero): senza trappola per amminoacidi.
Aminoacidi segnati in rosso.