Réduction de la liaison disulfure

Le ROXY Exceed avec un réacteur EC a été développé pour la réduction rapide et efficace des liaisons disulfure dans les protéines. La réduction des liaisons disulfure intra- et intermoléculaires est une étape petite mais cruciale du processus d’élucidation de la structure et d’attribution des sites de liaison par SM. La méthode est basée sur un potentiel électrique pour déclencher la réaction de réduction, aucun produit chimique réducteur n’est utilisé.

Traditionnellement, la réduction est effectuée à l’aide de produits chimiques concentrés, par exemple le dithiothreitol (DTT) qui doit être éliminé avant l’analyse LC/MS. On peut également utiliser des agents réducteurs sans thiol tels que le TCEP (tris (2-carboxyéthyl) phosphine). Cependant, la préparation des échantillons reste laborieuse et difficile à combiner avec la LC/MS en ligne. L’électrochimie dans une installation en ligne avec MS est propre, aucun produit chimique n’est nécessaire et le résultat peut être contrôlé instantanément.

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L’insuline, une petite protéine de 5733 Da, est utilisée comme composé modèle pour la réduction S-S. Il est constitué de 51 acides aminés formant deux chaînes, A et B, et contient 3 liaisons disulfure. Deux liaisons S-S inter-chaînes reliant les chaînes A et B et une liaison S-S intra-chaîne située sur la chaîne A. Les liaisons disulfure peuvent être complètement réduites en utilisant un réacteur électrochimique.