¿Qué es la detección amperométrica pulsada?
La detección amperométrica pulsada (PAD), se utiliza en el análisis por HPLC de carbohidratos y sustancias relacionadas. Con un pH elevado, los hidratos de carbono pueden oxidarse y analizarse con gran sensibilidad. Al utilizar PAD, las condiciones de medición se mantienen estables y reproducibles.
¿Cómo funciona la detección amperométrica pulsada?
En la detección amperométrica pulsada (PAD), se aplica una secuencia rápida de pasos de potencial. Durante una parte de esta «secuencia de impulsos», la señal se muestrea. La otra parte de la secuencia de pasos, son los pasos de limpieza oxidativa y reductiva. Durante esta limpieza, se regenera el electrodo de trabajo de oro. El proceso suele repetirse aproximadamente cada medio segundo. Esto garantiza unas condiciones de detección estables y reproducibles.
El uso de PAD es realmente necesario, porque la detección EC (oxidación) de carbohidratos da lugar a productos de reacción que se adhieren a la superficie del electrodo. Esto contamina el electrodo y provoca una mala reproducibilidad. Cuando se utiliza PAD con pasos de limpieza, el electrodo permanece limpio y reproducible.
Un efecto secundario del modo de pulso aplicado es que el electrodo de oro se consume lentamente en el proceso. Tras un uso prolongado (semanas, meses) se puede observar que ha desaparecido un poco de oro. Las celdas de flujo Antec utilizan un electrodo de oro macizo, en caso necesario la superficie del electrodo puede ser restaurada utilizando nuestro kit de pulido de metal. El pulso de detección tradicional de 3 pasos tiene más desgaste que el nuevo pulso de 4 pasos. Una FlexCell con electrodo de trabajo reemplazable puede utilizarse para ambas cosas. Se recomienda un SenCell sólo para un pulso de 4 pasos.
Potencial de medición E1 con impulso de limpieza E2 – E4. La medición se realiza en la segunda mitad de E1 (muestra t), cuando la corriente se estabiliza.
¿Por qué es necesaria la eliminación del dióxido de carbono en los HPAEC?
La cromatografía de intercambio aniónico de alto rendimiento (HPAEC) se utiliza para el análisis por HPLC de los hidratos de carbono. Sólo a pH muy elevados los hidratos de carbono son aniones y pueden separarse. Por lo tanto, sólo pueden utilizarse unas pocas columnas HPAEC, ya que tienen que utilizarse a pH 12 o superior.
Con un pH tan elevado, el dióxido de carbono del aire circundante se disuelve en la fase móvil y forma iones carbonato. La concentración de carbonato, que aumenta lentamente, entra en la columna, ocupa grupos funcionales de la fase estacionaria y modifica los tiempos de retención de los hidratos de carbono. Por lo tanto, es muy importante eliminar correctamente el dióxido de carbono de la fase móvil para garantizar unas condiciones de separación reproducibles.
La bandeja de eluyentes ALEXYS dispone de la infraestructura necesaria para mantener las botellas de disolvente bajo un manto de nitrógeno (o helio). Tapones herméticos al gas, tubos, racores y un manómetro para ajustar el flujo de gas y mantener el consumo de gas inerte al mínimo absoluto.
Separación HPAEC y detección amperométrica pulsada de carbohidratos.