Détection ampérométrique pulsée
Qu’est-ce que la détection ampérométrique pulsée ?
La détection ampérométrique pulsée (PAD), est utilisée dans l’analyse HPLC des hydrates de carbone et des substances apparentées. À un pH élevé, les glucides peuvent être oxydés et analysés avec une grande sensibilité. En utilisant la PAD, les conditions de mesure restent stables et reproductibles.
Comment fonctionne la détection ampérométrique pulsée ?
Dans la détection ampérométrique pulsée (PAD), une séquence rapide d’étapes de potentiel est appliquée. Pendant une partie de cette « séquence d’impulsions », le signal est échantillonné. L’autre partie de la séquence d’étapes est constituée d’étapes de nettoyage oxydatif et réducteur. Pendant ce nettoyage, l’électrode de travail en or est régénérée. Le processus se répète généralement toutes les demi-secondes environ. Cela garantit des conditions de détection stables et reproductibles.
L’utilisation du PAD est vraiment nécessaire, car la détection par la CE (oxydation) des glucides entraîne des produits de réaction qui collent à la surface de l’électrode. Cela contamine l’électrode et entraîne une mauvaise reproductibilité. En utilisant le PAD avec des étapes de nettoyage, l’électrode reste propre et reproductible.
Un effet secondaire du mode d’impulsion appliqué est que l’électrode en or est lentement consommée dans le processus. Après une utilisation prolongée (semaines, mois), on peut constater qu’un peu d’or a disparu. Les cellules de débit Antec utilisent une électrode en or massif, en cas de besoin la surface de l’électrode peut être restaurée en utilisant notre kit de polissage de métal. L’impulsion de détection traditionnelle à 3 étapes s’use davantage que l’impulsion plus récente à 4 étapes. Une FlexCell avec électrode de travail remplaçable peut être utilisée pour les deux. Un SenCell est recommandé pour une impulsion à 4 étapes seulement.
Potentiel de mesure E1 avec impulsion de nettoyage E2 – E4. La mesure se fait sur la seconde moitié de E1 (échantillon t), lorsque le courant est stabilisé.
Pourquoi l’élimination du dioxyde de carbone est-elle nécessaire dans les HPAEC?
La chromatographie d’échange d’anions à haute performance (HPAEC) est utilisée pour l’analyse des hydrates de carbone par HPLC. Ce n’est qu’à un pH très élevé que les hydrates de carbone sont des anions et peuvent être séparés. Par conséquent, seules quelques colonnes HPAEC peuvent être utilisées car elles doivent être utilisées à un pH de 12 ou plus.
À un pH aussi élevé, le dioxyde de carbone de l’air ambiant se dissout dans la phase mobile et forme des ions carbonate. La concentration de carbonate, qui augmente lentement, pénètre dans la colonne, occupe les groupements fonctionnels de la phase stationnaire et modifie les temps de rétention des glucides. Il est donc très important d’éliminer correctement le dioxyde de carbone de la phase mobile pour garantir des conditions de séparation reproductibles.
Le plateau d’éluant ALEXYS dispose de l’infrastructure nécessaire pour maintenir les bouteilles de solvant sous une couverture d’azote (ou d’hélium). Des bouchons étanches au gaz, des tubes, des raccords et un manomètre permettent d’ajuster le débit de gaz et de maintenir la consommation de gaz inerte à un minimum absolu.
Séparation HPAEC et détection ampérométrique pulsée des hydrates de carbone.