AAT – Piège à acides aminés
- Piégeage efficace des acides aminés/peptides de petite taille
- Installation facile, en tant que précolonne
- Colonne de 4 x 50 mm, résine de 5 µm
Lors de l’analyse compositionnelle des monosaccharides des glycoprotéines à l’aide de l’HPAEC-PAD, la présence d’acides aminés et de petits peptides peut interférer avec la quantification des analytes d’intérêt.
Ces acides aminés et ces petits peptides sont générés lors de l’hydrolyse acide des glycoprotéines pour libérer les monosaccharides de l’épine dorsale de la protéine.
Si la concentration des acides aminés, en particulier la lysine et la glutamine, est suffisamment élevée par rapport à celle des monosaccharides libérés, ils interfèrent avec la quantification des monosaccharides en raison de la coélution.
En outre, les acides aminés sont moins efficacement éliminés de la surface de l’électrode Au en raison de la forme d’onde potentielle sous-optimale appliquée pour la détection des monosaccharides, ce qui peut entraîner un encrassement et une perte de réponse.
Afin d’éliminer l’interférence des acides aminés et d’assurer une performance optimale de votre analyse des monosaccharides à l’aide du HPAEC-PAD, Antec Scientific introduit une colonne de piégeage des acides aminés.
La colonne piège à acides aminés est basée sur une nouvelle résine polymère monodisperse de 5 µm fonctionnalisée avec des groupes actifs qui piègent ou retardent temporairement l’élution des acides aminés et des petits peptides dans les conditions de séparation (10 – 20 mM NaOH) utilisées dans l’analyse des monosaccharides par HPAEC-PAD.
Par la suite, les acides aminés piégés sont élués lors de l’étape de lavage/régénération à un pH élevé (typiquement 100 – 200 mM NaOH), sans encrasser la surface de l’électrode de travail Au.
La performance du piège à acides aminés est démontrée dans la figure 1.
Un mélange de 6 monosaccharides et de 4 standards d’acides aminés a été injecté sur une colonne SweetSep™ AEX20 avec et sans colonne piège.
Sans piège à acides aminés dans le système, en particulier la lysine et la glutamine, coéluent avec les monosaccharides d’intérêt.
Il est évident qu’avec la colonne piège à acides aminés, le problème de la coélution des acides aminés est efficacement éliminé.
Fig. 1. Analyse des glucides avec et sans piège à acides aminés SweetSep™.
Les pics interférents de lysine et de glutamine ne posent plus de problème dans le chromatogramme supérieur.
Conditions : séparation sur colonne SweetSep™ AEX20 utilisant un éluant NaOH 20 mM (30°C, 0,7 mL/min).
La colonne piège à acides aminés est utilisée comme pré-colonne.
Échantillon injecté : 10 µL de standards dans l’eau DI de 10 µM de monosaccharides (fucose, galactosamine, glucosamine, galactose, glucose et mannose) et de 1 mM d’acides aminés (arginine, lysine et glutamine).
En haut (rouge) : avec piège à acides aminés ; en bas (noir) : sans piège à acides aminés.
Acides aminés marqués en rouge.