{"id":17824,"date":"2021-10-10T13:52:06","date_gmt":"2021-10-10T13:52:06","guid":{"rendered":"https:\/\/antecscientific.com\/tecniche\/che-cose-lhplc\/"},"modified":"2023-02-16T21:16:57","modified_gmt":"2023-02-16T21:16:57","slug":"che-cose-lhplc","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/antecscientific.com\/it\/prodotti\/tecniche\/che-cose-lhplc\/","title":{"rendered":"Che cos&#8217;\u00e8 l&#8217;HPLC?"},"content":{"rendered":"<p>[et_pb_section fb_built=&#8221;1&#8243; admin_label=&#8221;Header&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.1&#8243; background_image=&#8221;https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2020\/10\/Antec_technique_1_2.jpg&#8221; parallax=&#8221;on&#8221; custom_padding=&#8221;2vw|0px|200px|0px|false|false&#8221; collapsed=&#8221;on&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_row _builder_version=&#8221;3.25&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_column type=&#8221;4_4&#8243; _builder_version=&#8221;3.25&#8243; custom_padding=&#8221;|||&#8221; 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Pu\u00f2 essere applicato per misurare la concentrazione di carboidrati negli alimenti e nelle bevande, di pesticidi nelle acque di superficie per l&#8217;analisi ambientale o di catecolamine nelle urine per scopi clinici, per citarne alcuni.<\/p>\n<p>L&#8217;UHPLC (U sta per &#8220;ultra&#8221;) si basa sullo stesso principio, solo che vengono applicate colonne cromatografiche pi\u00f9 nuove ed efficienti. Le colonne UHPLC sono riempite con particelle pi\u00f9 piccole con migliori prestazioni di separazione. A causa dei canali stretti tra le piccole particelle, la pressione in questo sistema \u00e8 pi\u00f9 elevata. Per questo motivo, spesso sono necessari strumenti speciali.<\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][et_pb_column type=&#8221;1_3&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; custom_padding=&#8221;5%|5%|||false|false&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; custom_padding__hover=&#8221;|||&#8221;][et_pb_image src=&#8221;https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/ALEXYS-front-dark-scaled.jpg&#8221; title_text=&#8221;ALEXYS anteriore scuro&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.2&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_image][et_pb_text admin_label=&#8221;image explanation&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.3&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;13px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<p><em>Un sistema HPLC con a sinistra una pompa con bottiglie di fase mobile, un autocampionatore e un rivelatore (a destra).<br \/><\/em><\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row custom_padding_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; admin_label=&#8221;Linea divisoria&#8221; _builder_version=&#8221;4.5.6&#8243; width=&#8221;auto&#8221; max_width=&#8221;none&#8221; custom_padding=&#8221;|0px|||false|false&#8221; custom_padding_tablet=&#8221;&#8221; custom_padding_phone=&#8221;|10%|||false|false&#8221; collapsed=&#8221;on&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_column type=&#8221;4_4&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_divider color=&#8221;#dee1e6&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_divider][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row column_structure=&#8221;2_3,1_3&#8243; custom_padding_last_edited=&#8221;off|desktop&#8221; _builder_version=&#8221;4.5.6&#8243; width=&#8221;auto&#8221; max_width=&#8221;none&#8221; custom_padding=&#8221;27px|0|27px|0px|false|false&#8221; custom_padding_tablet=&#8221;|0px||0px||true&#8221; locked=&#8221;off&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_column type=&#8221;2_3&#8243; _builder_version=&#8221;3.25&#8243; custom_padding=&#8221;|||&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; custom_padding__hover=&#8221;|||&#8221;][et_pb_text admin_label=&#8221;Subtitle&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.3&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;16px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;|600||on|||||&#8221; header_2_text_color=&#8221;#df0834&#8243; header_2_font_size=&#8221;20px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; custom_margin=&#8221;||0px||false|false&#8221; custom_padding=&#8221;||0px||false|false&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<h2>Come funziona l&#8217;HPLC?<\/h2>\n<p>[\/et_pb_text][et_pb_text admin_label=&#8221;Paragraph&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.3&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;18px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; text_orientation=&#8221;justified&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; custom_margin=&#8221;0px||||false|false&#8221; custom_padding=&#8221;0px||||false|false&#8221; hover_enabled=&#8221;0&#8243; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; sticky_enabled=&#8221;0&#8243;]<\/p>\n<p>Un sistema HPLC \u00e8 costituito da una o pi\u00f9 pompe, un autocampionatore, un rivelatore e un software di acquisizione dati. Il cuore del sistema HPLC \u00e8 una colonna cromatografica, riempita con particelle di fase stazionaria, dove avviene la separazione delle sostanze in una miscela. Gli strumenti sono collegati da un tubo, chiamato percorso di flusso. Le pompe forniscono una soluzione carrier, o fase mobile, attraverso il percorso di flusso del sistema. Il campione da analizzare viene introdotto nel percorso di flusso da un autocampionatore. In genere, la velocit\u00e0 di flusso nella maggior parte degli HPLC \u00e8 compresa tra 0,05 e 2 mL\/min. La pressione nel sistema dipende principalmente dalle dimensioni delle particelle della fase stazionaria, dalla lunghezza della colonna e dalla portata. Le pressioni tipiche dell&#8217;HPLC vanno da 100 a 400 bar.<\/p>\n<p>Il principio di separazione in HPLC si basa sulla distribuzione dell&#8217;analita tra la fase stazionaria (colonna riempita di particelle) e la fase mobile (solvente che scorre). In un sistema HPLC ben funzionante, il tempo trascorso nella colonna \u00e8 unico per ogni sostanza della miscela. Questo &#8220;tempo di ritenzione&#8221; identifica la sostanza. Nella cromatografia in fase inversa si utilizzano particelle in fase stazionaria non polari. Di conseguenza, le sostanze meno polari hanno un&#8217;interazione pi\u00f9 forte e trascorrono pi\u00f9 tempo in colonna rispetto alle sostanze polari.<\/p>\n<p>Il rivelatore misura continuamente la fase mobile che scorre attraverso la cella di rivelazione. Le sostanze che eluiscono dalla colonna provocano una deviazione del segnale, sotto forma di picco gaussiano. Il segnale viene memorizzato e analizzato in un cromatogramma dal software di acquisizione dati su un PC collegato al rivelatore.<\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][et_pb_column type=&#8221;1_3&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; custom_padding=&#8221;5%|5%|||false|false&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; custom_padding__hover=&#8221;|||&#8221;][et_pb_image src=&#8221;https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2021\/09\/hplc1.jpg&#8221; title_text=&#8221;hplc1&#8243; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_image][et_pb_text admin_label=&#8221;image explanation&#8221; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;13px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<p><em>Schema della configurazione HPLC, la valvola di iniezione fa parte di un autocampionatore.<br \/><\/em><\/p>\n<p>[\/et_pb_text][et_pb_image src=&#8221;https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2021\/09\/chrom1.jpg&#8221; title_text=&#8221;cromatogramma1&#8243; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_image][et_pb_text admin_label=&#8221;image explanation&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.2&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;13px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<p><em>Tre istantanee nel tempo mentre una miscela viene trasportata attraverso una colonna. All&#8217;inizio (a sinistra), non c&#8217;\u00e8 separazione. Quando la massa del campione si sposta lungo il percorso del flusso, le sostanze (\u2206 e \u25cf) vengono separate.<\/em><\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row custom_padding_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; admin_label=&#8221;Linea divisoria&#8221; _builder_version=&#8221;4.5.6&#8243; width=&#8221;auto&#8221; max_width=&#8221;none&#8221; custom_padding=&#8221;|0px|||false|false&#8221; custom_padding_tablet=&#8221;&#8221; custom_padding_phone=&#8221;|10%|||false|false&#8221; collapsed=&#8221;on&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_column type=&#8221;4_4&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_divider color=&#8221;#dee1e6&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_divider][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row column_structure=&#8221;2_3,1_3&#8243; custom_padding_last_edited=&#8221;off|desktop&#8221; _builder_version=&#8221;4.5.6&#8243; width=&#8221;auto&#8221; max_width=&#8221;none&#8221; custom_padding=&#8221;27px|0|27px|0px|false|false&#8221; custom_padding_tablet=&#8221;|0px||0px||true&#8221; locked=&#8221;off&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][et_pb_column type=&#8221;2_3&#8243; _builder_version=&#8221;3.25&#8243; custom_padding=&#8221;|||&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; custom_padding__hover=&#8221;|||&#8221;][et_pb_text admin_label=&#8221;Subtitle&#8221; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;16px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;|600||on|||||&#8221; header_2_text_color=&#8221;#df0834&#8243; header_2_font_size=&#8221;20px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; custom_margin=&#8221;||0px||false|false&#8221; custom_padding=&#8221;||0px||false|false&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<h2>Che cos&#8217;\u00e8 un cromatogramma?<\/h2>\n<p>[\/et_pb_text][et_pb_text admin_label=&#8221;Paragraph&#8221; _builder_version=&#8221;4.11.3&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;18px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; text_orientation=&#8221;justified&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; custom_margin=&#8221;0px||||false|false&#8221; custom_padding=&#8221;0px||||false|false&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<p>Un cromatogramma \u00e8 un grafico che contiene i dati raccolti da un rivelatore HPLC dal software di acquisizione dati. I dati vengono memorizzati in un file che contiene il segnale e il tempo di ritenzione di una corsa cromatografica. Spesso si ottiene un intero gruppo di cromatogrammi in sequenza, contenenti le analisi dei campioni e degli standard per la calibrazione. Queste informazioni vengono utilizzate per l&#8217;identificazione e la quantificazione, l&#8217;obiettivo finale dell&#8217;analisi. Utilizzando gli standard di calibrazione, l&#8217;altezza del segnale \u00e8 correlata alla concentrazione e il tempo di ritenzione identifica una sostanza in campioni sconosciuti.<\/p>\n<p>Occorre prestare attenzione che il picco misurato nel cromatogramma del campione non sia in co-eluizione con altre sostanze con lo stesso tempo di ritenzione. Questo e altri controlli fanno parte della validazione di un saggio.<\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][et_pb_column type=&#8221;1_3&#8243; _builder_version=&#8221;4.4.8&#8243; custom_padding=&#8221;5%|5%|||false|false&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221; custom_padding__hover=&#8221;|||&#8221;][et_pb_image src=&#8221;https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2020\/07\/ma_5min_sm2.png&#8221; title_text=&#8221;ma_5min_sm2&#8243; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;][\/et_pb_image][et_pb_text admin_label=&#8221;image explanation&#8221; _builder_version=&#8221;4.10.5&#8243; text_font=&#8221;||||||||&#8221; text_font_size=&#8221;13px&#8221; text_line_height=&#8221;2em&#8221; header_font=&#8221;||||||||&#8221; header_2_font=&#8221;Raleway|700|||||||&#8221; header_2_font_size=&#8221;50px&#8221; header_2_line_height=&#8221;1.4em&#8221; header_6_font=&#8221;Raleway|700||on|||||&#8221; header_6_font_size=&#8221;16px&#8221; header_6_letter_spacing=&#8221;5px&#8221; header_6_line_height=&#8221;1.8em&#8221; max_width=&#8221;700px&#8221; module_alignment=&#8221;center&#8221; header_2_font_size_tablet=&#8221;35px&#8221; header_2_font_size_phone=&#8221;25px&#8221; header_2_font_size_last_edited=&#8221;on|phone&#8221; global_colors_info=&#8221;{}&#8221;]<\/p>\n<p><em>Un cromatogramma con standard di calibrazione di diversi neurotrasmettitori.<\/em><\/p>\n<p>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][\/et_pb_section]<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Che cos&#8217;\u00e8 l&#8217;HPLC?L&#8217;HPLC o cromatografia liquida ad alte prestazioni \u00e8 una tecnica analitica per identificare e quantificare le sostanze in una soluzione. 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