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Lo scambio idrogeno-deuterio (HDX) \u00e8 utilizzato per studiare la struttura terziaria delle proteine o il loro ripiegamento. Le regioni esterne della proteina ripiegata subiscono un facile scambio di idrogeno (H) con il deuterio (D). Nelle fasi successive del flusso di lavoro, le proteine vengono dispiegate e la sequenza aminoacidica viene delucidata mediante MS. Gli amminoacidi con deuterio provengono ovviamente dalla regione esterna della proteina ripiegata. Per ottenere risultati affidabili \u00e8 importante che la reazione di scambio H\/D venga interrotta (quenched) e che i cambiamenti vengano conservati, una volta che lo svolgimento delle proteine e le fasi successive hanno luogo.<\/p>\n
La riduzione elettrochimica controllata dei legami S-S \u00e8 stata applicata con successo per il dispiegamento di proteine pi\u00f9 grandi come gli anticorpi, sostituendo la dura riduzione chimica che spesso comprometteva lo scambio H\/D. L’uso di agenti riducenti classici come DTT o TCEP \u00e8 spesso inefficace in condizioni di quenching (pH acido e bassa temperatura). Pertanto, l’uso di ROXY EC con i suoi elettrodi proprietari a base di titanio per la scissione delicata e controllata del legame S-S apre nuove opportunit\u00e0 nei flussi di lavoro HDX\/MS, con conseguente aumento della copertura delle sequenze.<\/p>\n
Le due figure mostrano la copertura della sequenza per il Nerve Growth Factor-\u03b2 con riduzione chimica ed elettrochimica (EC). L’integrazione della cella di flusso elettrochimica nel flusso di lavoro HDX\/MS ha permesso di ottenere una copertura di sequenza molto pi\u00f9 elevata rispetto alla riduzione chimica (99% contro 46%), consentendo una caratterizzazione molto pi\u00f9 completa dell’NGF. Adattato da Trajberg E. et al., Anal. Chem.87 (2015) 8880.<\/p>\n
[\/et_pb_text][\/et_pb_column][et_pb_column type=”1_3″ _builder_version=”4.16″ custom_padding=”5%|5%|||false|false” global_colors_info=”{}” custom_padding__hover=”|||”][et_pb_image src=”https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2021\/10\/hd-exchange-new.jpg” title_text=”hd-scambio-nuovo” _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n
Deuterazione, seguita da riduzione del legame disolfuro nel flusso di lavoro di HDX-MS.<\/em><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=”https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2021\/10\/tcep-300×199.png” title_text=”tcep” _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”]Copertura della sequenza, utilizzando un flusso di lavoro con riduzione chimica (TCEP).<\/em>[\/et_pb_text][et_pb_image src=”https:\/\/antecscientific.com\/wp-content\/uploads\/2021\/10\/er-hdx-300×235.png” title_text=”er-hdx” _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”]Copertura delle sequenze, utilizzando un flusso di lavoro con riduzione elettrochimica.<\/em>[\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row custom_padding_last_edited=”on|phone” admin_label=”Linea divisoria” _builder_version=”4.16″ width=”auto” max_width=”none” custom_padding=”|0px|||false|false” custom_padding_tablet=”” custom_padding_phone=”|10%|||false|false” locked=”off” collapsed=”on” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ global_colors_info=”{}”][et_pb_divider color=”#dee1e6″ _builder_version=”4.16″ global_colors_info=”{}”][\/et_pb_divider][\/et_pb_column][\/et_pb_row][\/et_pb_section][et_pb_section fb_built=”1″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_module=”10077″ global_colors_info=”{}”][et_pb_row column_structure=”1_2,1_2″ module_class=”substancetoggle” _builder_version=”4.19.1″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”1_2″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.19.1″ _module_preset=”default” header_2_font_size=”18px” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_toggle title=”Metabolismo dei farmaci” 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elettrochimici per MS e sintesi<\/h2>\n
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Metabolismo dei farmaci e degli xenobiotici, misurazione del metabolismo di fase 1 e fase 2, metabolismo ossidativo, screening automatizzato delle reazioni REDOX<\/span><\/a><\/li>\n<\/ul>\n\n
Scomposizione dei POP, conversione ossidativa e sintesi dei TP, rifiuti e acqua potabile<\/span><\/a><\/li>\n<\/ul>\n\n
Scambio idrogeno-deuterio
<\/span><\/a><\/li>\n<\/ul>\n\n
Colesterolo\/esisterolo, fosfolipidi, esteri metilici di acidi grassi (FAME)<\/span><\/a><\/li>\n<\/ul>\n\n
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Sintesi elettrochimica di metaboliti, prodotti di degradazione, sintesi di quantit\u00e0 di \u00b5g, scale-up<\/span><\/a><\/li>\n<\/ul>\nNote applicative<\/h3>\n
Poster<\/h3>\n