{"id":12918,"date":"2021-10-10T13:52:06","date_gmt":"2021-10-10T13:52:06","guid":{"rendered":"https:\/\/antecscientific.com\/produkte\/techniken\/was-ist-hplc\/"},"modified":"2022-12-06T13:02:51","modified_gmt":"2022-12-06T13:02:51","slug":"was-ist-hplc","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/antecscientific.com\/de\/produkte\/techniken\/was-ist-hplc\/","title":{"rendered":"Was ist HPLC?"},"content":{"rendered":"

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Was ist HPLC?<\/h2>\n

[\/et_pb_text][et_pb_text admin_label=“Paragraph“ _builder_version=“4.11.3″ text_font=“||||||||“ text_font_size=“18px“ text_line_height=“2em“ header_font=“||||||||“ header_2_font=“Raleway|700|||||||“ header_2_font_size=“50px“ header_2_line_height=“1.4em“ header_6_font=“Raleway|700||on|||||“ header_6_font_size=“16px“ header_6_letter_spacing=“5px“ header_6_line_height=“1.8em“ text_orientation=“justified“ max_width=“700px“ module_alignment=“center“ custom_margin=“0px||||false|false“ custom_padding=“0px||||false|false“ header_2_font_size_tablet=“35px“ header_2_font_size_phone=“25px“ header_2_font_size_last_edited=“on|phone“ global_colors_info=“{}“]<\/p>\n

HPLC oder Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie ist eine Analysetechnik zur Identifizierung und Quantifizierung von Substanzen in einer L\u00f6sung. Sie kann zur Messung der Konzentration von Kohlenhydraten in Lebensmitteln und Getr\u00e4nken, von Pestiziden in Oberfl\u00e4chenwasser f\u00fcr die Umweltanalyse oder von Katecholaminen im Urin f\u00fcr klinische Zwecke eingesetzt werden, um nur einige Beispiele zu nennen.<\/p>\n

Die UHPLC (U steht f\u00fcr ‚ultra‘) beruht auf demselben Prinzip, es werden lediglich neuere, effizientere Chromatographies\u00e4ulen verwendet. UHPLC-S\u00e4ulen sind mit kleineren Partikeln mit besserer Trennleistung gef\u00fcllt. Wegen der engen Kan\u00e4le zwischen kleinen Partikeln ist der Druck in einem solchen System h\u00f6her. Aus diesem Grund sind oft spezielle Instrumente erforderlich.<\/p>\n

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Ein HPLC-System mit einer Pumpe mit Flaschen f\u00fcr die mobile Phase auf der linken Seite, einem Autosampler und einem Detektor (rechts).
<\/em><\/p>\n

[\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row custom_padding_last_edited=“on|phone“ admin_label=“Dividerline“ _builder_version=“4.5.6″ width=“auto“ max_width=“none“ custom_padding=“|0px|||false|false“ custom_padding_tablet=““ custom_padding_phone=“|10%|||false|false“ collapsed=“on“ global_colors_info=“{}“][et_pb_column type=“4_4″ _builder_version=“4.4.8″ global_colors_info=“{}“][et_pb_divider color=“#dee1e6″ _builder_version=“4.4.8″ global_colors_info=“{}“][\/et_pb_divider][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row column_structure=“2_3,1_3″ custom_padding_last_edited=“off|desktop“ _builder_version=“4.5.6″ width=“auto“ max_width=“none“ custom_padding=“27px|0|27px|0px|false|false“ custom_padding_tablet=“|0px||0px||true“ locked=“off“ global_colors_info=“{}“][et_pb_column type=“2_3″ _builder_version=“3.25″ custom_padding=“|||“ global_colors_info=“{}“ custom_padding__hover=“|||“][et_pb_text admin_label=“Subtitle“ _builder_version=“4.11.3″ text_font=“||||||||“ text_font_size=“16px“ text_line_height=“2em“ header_font=“||||||||“ header_2_font=“|600||on|||||“ header_2_text_color=“#df0834″ header_2_font_size=“20px“ header_2_line_height=“1.4em“ header_6_font=“|700||on|||||“ header_6_font_size=“16px“ header_6_letter_spacing=“5px“ header_6_line_height=“1.8em“ max_width=“700px“ module_alignment=“center“ custom_margin=“||0px||false|false“ custom_padding=“||0px||false|false“ header_2_font_size_tablet=“25px“ header_2_font_size_phone=“25px“ header_2_font_size_last_edited=“on|phone“ global_colors_info=“{}“]<\/p>\n

Wie funktioniert die HPLC?<\/h2>\n

[\/et_pb_text][et_pb_text admin_label=“Paragraph“ _builder_version=“4.11.3″ text_font=“||||||||“ text_font_size=“18px“ text_line_height=“2em“ header_font=“||||||||“ header_2_font=“Raleway|700|||||||“ header_2_font_size=“50px“ header_2_line_height=“1.4em“ header_6_font=“Raleway|700||on|||||“ header_6_font_size=“16px“ header_6_letter_spacing=“5px“ header_6_line_height=“1.8em“ text_orientation=“justified“ max_width=“700px“ module_alignment=“center“ custom_margin=“0px||||false|false“ custom_padding=“0px||||false|false“ hover_enabled=“0″ header_2_font_size_tablet=“35px“ header_2_font_size_phone=“25px“ header_2_font_size_last_edited=“on|phone“ global_colors_info=“{}“ sticky_enabled=“0″]<\/p>\n

Ein HPLC-System besteht aus einer oder mehreren Pumpen, einem Autosampler, einem Detektor und einer Datenerfassungssoftware. Das Herzst\u00fcck des HPLC-Systems ist eine mit Partikeln der station\u00e4ren Phase gef\u00fcllte chromatographische S\u00e4ule, in der die Trennung der Substanzen in einem Gemisch erfolgt. Die Instrumente sind durch Schl\u00e4uche verbunden, die als Durchflussweg bezeichnet werden. Die Pumpe(n) f\u00f6rdern eine Tr\u00e4gerl\u00f6sung oder mobile Phase durch den Flussweg des Systems. Die zu analysierende Probe wird \u00fcber einen Autosampler in den Flussweg eingebracht. Normalerweise liegt die Flussrate bei den meisten HPLC-Ger\u00e4ten zwischen 0,05 und 2 mL\/min. Der Druck im System h\u00e4ngt haupts\u00e4chlich von der Partikelgr\u00f6\u00dfe der station\u00e4ren Phase, der S\u00e4ulenl\u00e4nge und der Flussrate ab. Typische Dr\u00fccke in der HPLC liegen zwischen 100 und 400 bar.<\/p>\n

Das Trennungsprinzip der HPLC beruht auf der Verteilung des Analyten zwischen der station\u00e4ren Phase (mit Partikeln gef\u00fcllte S\u00e4ule) und der mobilen Phase (durchflie\u00dfendes L\u00f6sungsmittel). In einem gut funktionierenden HPLC-System ist die Verweildauer in der S\u00e4ule f\u00fcr jeden Stoff im Gemisch einzigartig. Diese „Retentionszeit“ identifiziert die Substanz. Bei der Umkehrphasenchromatographie werden unpolare station\u00e4re Phasenpartikel verwendet. Infolgedessen haben die weniger polaren Substanzen eine st\u00e4rkere Wechselwirkung und verbringen mehr Zeit in der S\u00e4ule als polare Substanzen.<\/p>\n

Der Detektor misst kontinuierlich die mobile Phase, die durch die Detektionszelle flie\u00dft. Substanzen, die aus der S\u00e4ule eluieren, f\u00fchren zu einer Ablenkung des Signals in Form eines Gau\u00df-Peaks. Das Signal wird von einer Datenerfassungssoftware auf einem PC, der an den Detektor angeschlossen ist, gespeichert und in einem Chromatogramm ausgewertet.<\/p>\n

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Schematische HPLC-Konfiguration, das Injektionsventil ist Teil eines Autosamplers.
<\/em><\/p>\n

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Drei Schnappsch\u00fcsse in der Zeit, w\u00e4hrend ein Gemisch durch eine S\u00e4ule transportiert wird. Zu Beginn (links) gibt es keine Trennung. Wenn die Probe sich weiter durch den Flussweg bewegt, werden die Substanzen (\u2206 und \u25cf) getrennt.<\/em><\/p>\n

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Was ist ein Chromatogramm?<\/h2>\n

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Ein Chromatogramm ist ein Diagramm, das die Daten enth\u00e4lt, die von einem HPLC-Detektor durch eine Datenerfassungssoftware erfasst werden. Die Daten werden in einer Datei gespeichert, sie enth\u00e4lt das Signal und die Retentionszeit eines chromatographischen Laufs. Oft wird eine ganze Reihe von Chromatogrammen nacheinander erstellt, die die Analysen von Proben und Standards zur Kalibrierung enthalten. Diese Informationen werden zur Identifizierung und Quantifizierung verwendet, dem eigentlichen Ziel der Analyse. Mit Hilfe von Kalibrierstandards wird die Signalh\u00f6he mit der Konzentration in Beziehung gesetzt und die Retentionszeit identifiziert eine Substanz in unbekannten Proben.<\/p>\n

Es ist darauf zu achten, dass der im Probenchromatogramm gemessene Peak nicht mit anderen Substanzen mit der gleichen Retentionszeit ko-eluiert ist. Diese und andere Pr\u00fcfungen sind Teil einer Assay-Validierung.<\/p>\n

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Ein Chromatogramm mit Kalibrierstandards verschiedener Neurotransmitter.<\/em><\/p>\n

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Was ist HPLC?HPLC oder Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie ist eine Analysetechnik zur Identifizierung und Quantifizierung von Substanzen in einer L\u00f6sung. Sie kann zur Messung der Konzentration von Kohlenhydraten in Lebensmitteln und Getr\u00e4nken, von Pestiziden in Oberfl\u00e4chenwasser f\u00fcr die Umweltanalyse oder von Katecholaminen im Urin f\u00fcr klinische Zwecke eingesetzt werden, um nur einige Beispiele zu nennen. 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